试述胚胎细胞和体细胞核移植的操作方法。

正确答案： 胚胎细胞移植操作程序
（1）卵母细胞的去核。目前常用荧光诱导去核法。荧光引导去核法先用Hoechst33342对卵母细胞染色10～15分钟，然后，在荧光显微镜下确定核的位置后去核。
（2）供体核的准备和移植。胚胎克隆过程中，供体核来自早期胚胎。供体核的准备实质上是把供体胚胎分散成单个卵裂球，每个卵裂球就是一个供体核。取得卵裂球的方法主要是用蛋白酶消化透明带，然后用微管把胚胎分散成单个卵裂球。准备好卵裂球后，用移植微管吸取一个卵裂球，借助显微操作仪沿着去核孔将卵裂球注入卵子的卵黄周隙中，即完成移植过程。
（3）融合。融和方法目前使用电融和法。电融和是将操作后的卵母细胞和卵裂球复合体放入电解质溶液中，在一定强度的电脉冲作用下，使卵裂球与卵子相互融合。在电击过程中，两者的接触要与电场方向垂直。
（4）激活。在胚胎核移植过程中，通常用一定强度的电脉冲作用卵母细胞，造成卵母细胞内外膜结构出现瞬时通道，胞质内的钙离子进入受体核区，激活细胞核，则恢复细胞周期，同时启动胚胎发育。
（5）重构胚的培养。重构胚可体外做短时间培养后，移植到受体内，也可以在中间受体或体外培养发育到桑葚胚或囊胚时，在进行冷冻保存或胚胎移植。
体细胞核移植的操作方法：和胚胎细胞克隆基本相同，主要差别在供体细胞的选择。体细胞克隆的核供体是体外培养传代的体细胞，根据Campell等人提出的方法，体细胞需经过血清饥恶，即细胞培养液中血清浓度由10％降至0.5％，继续培养5d左右，使细胞处于休止的G0期，再移植到去核卵母细胞的卵黄周隙中，经电融和激活后获得克隆胚胎，移植到受体后获得克隆后代。后来细胞不经血清饥恶，可以直接移入去核卵母细胞中生产克隆胚胎，并且已在小鼠和牛上获得成功。

解析： 暂无解析