基因芯片是有规则排列的cDNA或寡核苷酸阵列。
1976年,Bishop等用v-src的cDNA为探针与正常鸡细胞杂交,证实在鸡细胞基因组中有一个与v-src同源的序列,称为()。
打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体,以便在 E.coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点,因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行:载体用 BamHI切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸;接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合,加入 DNA连接酶后进行温育,连接之后,将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因,所以,转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照: 对照1: 将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上; 对照2: 将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上; 对照3: 将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上; 对照4: 将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。 在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果,在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表 2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没有菌落生长(表 2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表 2)。从实验平板上挑出 12 个菌落,分离了质粒 DNA,并用 BamHI进行切割,其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带,另三个克隆中切出一个cDNA 片段,实验终于获得成功。 你如何看待第一次的实验结果?对照 1 的目的是什么?
写出下列符号的中文名称: SSB()snRNA() PRPP()cDNA()
cDNA 克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。
对RNA病毒可先用反转录酶转录出少量互补DNA(cDNA),然后用PCR技术进行扩增,反转录酶是( )。
cDNA
cDNA 克隆
基因文库和cDNA文库有何不同,为什么要建立cDNA文库?
构建cDNA文库时,首先须分离细胞的( )。