简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。
发布日期:2021-05-14
试题解析
蓝白斑筛选
蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。野生型埃希氏大肠菌(E.Coli)产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后,突变型大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切断,无法形成完整的β半乳糖苷酶,故不能对无色化合物X-gal进行切割,菌落呈白色。
- 中文名
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蓝白斑筛选
- 概述
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蓝白斑筛选是基因工程操作的一种
- 筛选原理
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是根据载体的遗传特征筛选重组
- 外文名
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Blue-White Screening
- 简介
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一种基因工程常用的重组菌筛选
基因工程
基因工程(genetic engineering)又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的遗传技术。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。
- 中文名
-
基因工程
- 别名
-
基因拼接技术、
- 外文名
-
genetic engineering
- 理论基础
-
分子遗传学
简单
《简单》是由杜婧荧作曲,李岩作词,新瑶演唱的歌曲;于2019年10月12日发行。
- 中文名
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简单
- 歌曲原唱
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新瑶
- 谱曲
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杜婧荧
- 歌曲语言
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普通话
- 歌曲时长
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0时05分22秒
- 填词
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李岩
- 编曲
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赵瑟
- 发行时间
-
2019-10-12
正确答案:
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法:是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质。这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补。
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落。
解析:
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